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hinDiii

HindIII切割位点是:A|AGCTT EcoRI切割为点是:G|AATTC http://www.neb.com/nebecomm/products/productR0104.asp http://www.neb.com/nebecomm/products/productr0101.asp

Enzyme Cat # Temp Supplied NEBuffer SAM % Activity in NEBuffer 1.1 2.1 3.1 CutSmart EcoRI R0101 37°C NEBuffer EcoRI no 25 100* 50 50* HindIII R0104 37°C NEBuffer 2.1 no 25 100 50 50 Double Digest Recommendations for EcoRI + Hin...

这样且可能不能全部切开,如果只是鉴定的话可以,但要是用于连接就会有大量的假阳性。你可以考虑先用一种酶切,回收后换另一种酶切,都是用最适Buffer,效果应该会好一些

你的这个电泳图基本上都可以看到主条带,从上往下第一条很清晰的条带就是基因组DNA,这条条带除了二号基本是比较完整而明亮的,做下游操作基本没啥问题。二号不是没有,而是量低了。四号和五号可以看到点样孔里面有些明亮的东西,这些是蛋白污染...

这么专业的问题,幸好遇见我了:) λ-HindIII digestion 由于其自身的末端带有COS粘性序列,可以自身结合在一起,这会影响23K和4K片段的亮度。如果4K条带明显暗就说明自身粘连比较严重。因此在电泳前应该60度预热5分钟。

限制性内切酶,能够特异性切割特定的回文序列 restriction sites HindIII and EcoRI就是指HindIII和EcoRI的限制性酶切位点

好古老的问题,我也遇到这样的问题,不知楼主是否有答案了。

我发现你是什么都不会埃。。。

以20微升体系为例 方法一 Buffer Tango™ 4微升 HindIII 1 微升 SalI 1 微升 Incubate at 37°C 2-3小时 方法二 Buffer R 2 HindIII 0.6 SalI 2.4 Incubate at 37°C 2-3小时 注意:最好用第一种方法,效果更好

做转化的时候,进行酶连接反应时,注意保持低温状态,因为LIGASE酶很容易降解。为保险起见,一般连接3小时,16度;对含有AMP-RESISTENCE的质粒铺板时,注意加AMP时的温度,温度过高,会使克隆株无法筛选出来。我的方法是培基高温消毒后放在烤箱...

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